2. Soluciones/Tinciones

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos en los que se incluyen bacterias, parásitos y hongos. La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología. Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinción de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de los hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología infecciosa.

2.1 Tinción Simple

Es la Tinción que usa un solo colorante, tiñe el microorganismo entero para reconocer estructura y morfología.

a) Safranina
Safranina...................................... 0.5 g
Agua destilada.............................. 100 mL

-Disolver el colorante en el agua.

b) Cristal violeta
Cristal violeta.................................... 1 g
Agua destilada.............................. 100 m

-Disolver el colorante en el agua.

c) Azul de metileno
Azul de metileno............................ 3 mL
Etanol de 96%............................. 20 mL
Agua destilada............................ 100 mL

-  Disolver el colorante en alcohol.
-  Agregar el agua y filtrar.


2.2 Tinción de Gram

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.

a) Cristal violeta y oxalato de amonio

Solución A:

Cristal violeta (pureza del colorante de por lo menos, el 90%)........ 2 g

Etanol (95%)................................................................................... 20 mL

Solución B:

Oxalato de amonio.............................................. 0.8 g

Agua destilada..................................................... 80 mL

-  Mezclar cada uno de los solutos en su disolvente respectivo.
-  Dejar la solución de oxalato de amonio en reposo durante una noche o calentar
ligeramente hasta que se solubilice.
-  Mezclar las dos soluciones y filtrar.

b) Solución de yodo yodurado. (Lugol)
Yodo (químicamente puro).............. 1 g
Yoduro de potasio........................... 2 g
Agua destilada............................ 300 mL
Preparación:
-  Combinar el yodo y el yoduro de potasio con la ayuda de un mortero.
-  Lavar el contenido de éste con pequeñas alícuotas de agua destilada.
-  Agregar agua suficiente para obtener un total de 300 mL.
-  Agitar fuertemente.
-  Almacenar la solución en una botella oscura y con tapón de vidrio.

c) Alcohol acetona

Alcohol etílico (95%)................................ 500 mL

Acetona.................................................... 300 mL

Preparación:

-  Mezclar los ingredientes respectivos de cada combinación para su uso.

d) Safranina
Safranina (pureza del colorante, 90%)....... 0.25 g
Alcohol etílico (95%)...................................... 10 mL
Agua destilada............................................ 1000 mL
Preparación:
-  Disolver el colorante en el alcohol.
-  Agregar el agua destilada.
-  Filtrar.
-  Almacenar en frasco con tapón de vidrio.


2.3 Tinción de Esporas

Las especies de los géneros Bacillus y Clostridium tienen la propiedad de formar endosporas que son formas de resistencia capaces de sobrevivir a altas temperaturas y medios adversos. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.), formándose una espora por cada forma vegetativa.

a) Verde de malaquita al 5%
Verde de malaquita................. 5 g
Agua destilada..................... 100 mL
Preparación:
-  Disolver el colorante en el agua y dejar en reposo durante una hora y media.
-  Filtrar.
-  Guardar en frasco oscuro.

b) Safranina al 0.5%
Safranina..................................... 0.5 g
Agua destilada............................ 100 mL
Preparación:
-  Disolver el colorante y filtrar.

2.4 Tinción de Flagelos

Es una tinción para lograr observar flagelos de bacterias.

a) Solución A
Fucsina básica............................ 1.2 g
Etanol (95%)............................... 100 mL
-  Disolver el colorante.
-  Filtrar y tapar perfectamente para evitar la evaporación.

b) Solución B

Acido tánico......................................... 3 g
Agua destilada................................. 100 mL
-  Disolver el reactivo.
Si la mezcla no se usa pronto adicionar fenol al 0.2% para prevenir el desarrollo de hongos.                   

                             

c) Solución C
Cloruro de sodio......................... 1.5 g
Agua destilada............................ 100 mL
-  Disolver el reactivo.
Esta solución es estable a temperatura ambiente.
Preparación:
-  Mezclar cantidades iguales de las soluciones A, B y C.

-  Guardar en frasco de vidrio y mantener bien tapado.